其實(shí),主要把握好前處理過(guò)程中的一些關(guān)鍵點(diǎn)和細(xì)節(jié),就可以極大減少前處理分析過(guò)程中出現(xiàn)的這些問(wèn)題。小編總結(jié)如下:
1、SPE小柱類(lèi)型或規(guī)格選擇不合適
凈化效果不佳,往往是由于選擇的SPE小柱類(lèi)型或規(guī)格不合適,一款合適的SPE小柱選擇,包含2個(gè)方面:吸附劑和柱規(guī)格。
首先,要選擇合適的吸附劑,才能較好對(duì)樣品進(jìn)行的凈化。關(guān)于吸附劑的選擇,一般情況下參考文獻(xiàn)或標(biāo)準(zhǔn),如果沒(méi)有相應(yīng)文獻(xiàn)可參考,有2個(gè)方法可供選擇,一個(gè)是根據(jù)目標(biāo)化合物的性質(zhì)選擇(見(jiàn)圖一),一個(gè)是根據(jù)樣品基質(zhì)性質(zhì)來(lái)選擇(見(jiàn)圖二)。
圖一:根據(jù)目標(biāo)化合物性質(zhì)選擇
圖二:根據(jù)樣品基質(zhì)性質(zhì)選擇
選擇好吸附劑后,選擇合適的柱規(guī)格也非常重要。
萃取柱的吸附劑能吸附的化合物質(zhì)量是有限的,一旦超過(guò)了這個(gè)數(shù)值,目標(biāo)物就不能被有效保留,使得回收結(jié)果大打折扣。
以下給出了萃取柱的上樣容量及洗脫參數(shù),可以參考一下。
2、篩板堵塞
在SPE操作過(guò)程中,我們還經(jīng)常遇到篩板堵塞,溶液無(wú)法通過(guò)固相萃取柱。
當(dāng)上樣液中含有較多顆粒雜質(zhì)時(shí),這些顆粒雜質(zhì)會(huì)在篩板上不斷聚集,形成一層顆粒層,隨著壓力的增加以及時(shí)間的延長(zhǎng),顆粒層會(huì)越來(lái)越嚴(yán)實(shí),最終導(dǎo)致篩板堵死,溶液無(wú)法通過(guò)固相萃取柱。
以下是常見(jiàn)的固相萃取柱的結(jié)構(gòu)圖,由柱管、篩板和填料3部分組成,其中篩板是一種具有多孔結(jié)構(gòu)的材料,起到固定填料和過(guò)濾溶液的作用。
遇到這種情況,可以在上樣前先高速離心或者過(guò)濾,然后取上清液或者濾液過(guò)固相萃取柱,減少顆粒雜質(zhì)的影響。
案例:食品中人工合成著色劑的測(cè)定,當(dāng)樣品為飲料、配制酒等液體時(shí),過(guò)固相萃取柱還是很輕松的,而當(dāng)樣品為糕點(diǎn)、谷物制品以及果凍時(shí),上樣前需先高速離心或者過(guò)濾,否則就很容易出現(xiàn)篩板堵塞的現(xiàn)象。
3、流速過(guò)快或過(guò)慢
其次,固相萃取過(guò)程中流速不能太快,流速太快不利于目標(biāo)化合物在填料上的保留以及溶劑與目標(biāo)化合物或者填料的相互作用,從而影響凈化及回收結(jié)果。當(dāng)然流速也不能太慢,否則會(huì)大大延長(zhǎng)前處理的時(shí)間。
以下是總結(jié)的原因和對(duì)策:
流速過(guò)慢的原因 | 對(duì)策 |
SPE選擇的粒徑過(guò)小 | 選擇大粒徑SPE |
樣品預(yù)處理后仍有懸浮不溶物 | 上樣前冷凍離心 |
樣品粘度太高 | 樣品稀釋 |
SPE阻力過(guò)大,液體無(wú)法靠重力滴落 | 使用手動(dòng)固相萃取柱裝置,通過(guò)調(diào)節(jié)止回閥,氣門(mén),抽負(fù)壓來(lái)調(diào)節(jié)流速 |
流速過(guò)快的原因 | 對(duì)策 |
SPE選擇的粒徑過(guò)大 | 選擇小粒徑的SPE |
重力作用時(shí)流速依然很快 | 使用手動(dòng)SPE裝置,調(diào)節(jié)止回閥 |
抽負(fù)壓時(shí)流速過(guò)快 | 調(diào)節(jié)止回閥和氣門(mén),控制真空表壓力恒定在一定范圍內(nèi) |
案例:SN/T1924-2011中淋洗固相萃取柱時(shí),先用水、甲醇,接著用正己烷淋洗,正己烷與前兩者的極性不同,從而導(dǎo)致流速很慢,遇到這種情況,可以增加負(fù)壓或者選用合適的溶劑進(jìn)行過(guò)渡。
4、凈化效果不理想
還有,SPE操作過(guò)程中,我們經(jīng)常還會(huì)遇到凈化效果不理想的情況,可采取以下策略:
5、重現(xiàn)性差
固相萃取中重現(xiàn)性差通常與產(chǎn)品質(zhì)量、流速以及操作有關(guān)。
固相萃取柱中填料的質(zhì)量、均勻性和松緊度都可能影響到方法的重現(xiàn)性,因此選擇質(zhì)量可靠的廠(chǎng)家很重要,遇到重現(xiàn)性差的實(shí)驗(yàn),可以選擇用標(biāo)準(zhǔn)溶液考察一下固相萃取柱的重現(xiàn)性。
固相萃取過(guò)程中流速的快慢也是影響重現(xiàn)性的重要因素之一,上樣、淋洗、洗脫過(guò)程中適當(dāng)降低流速,通常而言,流速低于5 mL/min時(shí)結(jié)果較為穩(wěn)定,有些實(shí)驗(yàn)可能需要更慢的流速。當(dāng)然,操作者水平的高低也會(huì)影響到結(jié)果的重現(xiàn)性。
具體總結(jié)如下:
可能原因 | 對(duì)策 |
操作步驟繁瑣,人為誤差導(dǎo)致 | 改變前處理方法或者制定SOP方法 |
復(fù)雜樣品基質(zhì)除雜效果不佳 | 改變整個(gè)前處理方法,加入內(nèi)標(biāo)或與基質(zhì)加標(biāo)數(shù)據(jù)做對(duì)比 |
上樣過(guò)程發(fā)生干涸 | 重新活化平衡 |
發(fā)生堵柱現(xiàn)象或者流速過(guò)快 | 前者改變預(yù)處理方法,后者使用止回閥控制流速 |
6、回收率不理想
在實(shí)驗(yàn)中,操作者關(guān)注較多的可能也是關(guān)于加標(biāo)回收率的問(wèn)題,固相萃取柱質(zhì)量的優(yōu)劣、固相萃取方法是否合適、操作者操作技能的高低都可以通過(guò)加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。
原則上加標(biāo)回收率應(yīng)在80%~120%之間,當(dāng)然對(duì)于多組分目標(biāo)物同時(shí)檢測(cè)時(shí),這一指標(biāo)可適當(dāng)放寬。
(1)目標(biāo)物在填料上保留不足
可能原因 | 對(duì)策 |
SPE柱選擇不合適 | 選擇更強(qiáng)保留的SPE柱 |
樣品上樣液或淋洗液的洗脫強(qiáng)度過(guò)強(qiáng) | 降低樣品上樣液或者淋洗液的洗脫強(qiáng)度 |
上樣體積/濃度過(guò)高,導(dǎo)致過(guò)載發(fā)生 | 減少上樣濃度或者增加填料量 |
操作過(guò)程中,小柱發(fā)生“干涸"現(xiàn)象 | 重新進(jìn)行活化/平衡,保證小柱在淋洗結(jié)束前不能發(fā)生“干涸"現(xiàn)象 |
可能原因 | 對(duì)策 |
小柱保留太強(qiáng) | 選擇保留稍弱的SPE柱 |
洗脫能力太強(qiáng) | 增強(qiáng)洗脫強(qiáng)度 |
洗脫體積太小 | 增強(qiáng)洗脫體積 |
可能原因 | 對(duì)策 |
預(yù)處理的提取不足 | 改變提取溶劑 |
目標(biāo)物質(zhì)不穩(wěn)定,揮發(fā)或者分解 | 改變提取和轉(zhuǎn)移方式,減少加熱溫度,受PH影響較大的化合物可加入緩沖鹽調(diào)節(jié)PH等 |
預(yù)處理過(guò)程復(fù)雜 | 簡(jiǎn)化預(yù)處理過(guò)程 |
目標(biāo)物與雜質(zhì)結(jié)合 | 換適當(dāng)?shù)姆椒ǔs質(zhì) |
雜質(zhì)干擾效應(yīng)太強(qiáng) | 改變前處理方法或與基質(zhì)加標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行對(duì)比 |
雜質(zhì)過(guò)多,超出小柱最高保留 | 改變預(yù)處理方法,減少上樣量或增加小柱填料量 |
產(chǎn)品分類(lèi)
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