食品中那非類物質(zhì)的測定

BJS201601

1. 范圍

本方法規(guī)定了食品（含保健食品）中西地那非、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非、偽伐地那非、他達(dá)拉非、氨基他達(dá)拉非含量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。

本方法適用于酒、咖啡、功能飲料、瑪咖片、保健食品中西地那非、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非、偽伐地那非、他達(dá)拉非、氨基他達(dá)拉非含量的測定。

1. 原理

試樣經(jīng)乙腈提取后，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測，外標(biāo)法定量。

1. 試劑和材料

注：水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。

3.1 試劑

3.1.1乙腈（CH₃CN)：色譜純。

3.1.2甲酸（CH₂O₂）：質(zhì)譜級。

3.1.3 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1ml用水稀釋至1000ml,用濾膜（3.4）過濾后備用。

3.1.4 0.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸1ml用乙腈稀釋至1000ml,用濾膜（3.4）過濾后備用。

3.2標(biāo)準(zhǔn)品

西地那非鹽酸鹽、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非鹽酸鹽、偽伐地那非、他達(dá)拉非、氨基他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量見附錄A表A.1，純度≥98%。

3.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別稱取西地那非鹽酸鹽、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非鹽酸鹽、偽伐地那非、他達(dá)拉非、氨基他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)品（3.2）0.1 g（至0.000 1 g），用乙腈溶解，并轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，此溶液濃度為1 mg/mL。貯存于4℃冰箱中，有效期3個(gè)月。

3.3.2混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：分別準(zhǔn)確吸取西地那非鹽酸鹽、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非鹽酸鹽、偽伐地那非、他達(dá)拉非、氨基他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量（3.3.1），用乙腈將其稀釋成含量分別為1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列混合工作液。臨用時(shí)配制。

3.4微孔濾膜：0.22 µm，有機(jī)相。

1. 儀器和設(shè)備

4.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源。

4.2 超聲波清洗器。

4.3 分析天平：感量分別為0.01 g和0.000 1 g。

1. 分析步驟

5.1 試樣制備

準(zhǔn)確稱取2g試樣（至0.01 g）于50 mL容量瓶中，加入40mL乙腈，超聲30 min，冷卻至室溫，用乙腈定容至刻度，搖勻，上清液經(jīng)微孔濾膜（3.4）過濾。取續(xù)濾液1.0mL于50 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

5.2 儀器參考條件

5.2.1 色譜條件

a）色譜柱： C18柱，1.8 μm，100 mm×2.1 mm（內(nèi)徑），或性能相當(dāng)者；

b）流動(dòng)相：A為0.1%甲酸水溶液（3.1.3），B為0.1%甲酸乙腈溶液（3.1.4），洗脫梯度見表1；

c）流速：0.3 mL/min；

d）柱溫：35℃；

e）進(jìn)樣量：2 μL。

表1 洗脫梯度

5.2.2 質(zhì)譜條件

a）電離方式：電噴霧正離子模式；

b）檢測方式：多反應(yīng)檢測（MRM）；

c）霧化氣壓力：30psi；

d）離子噴霧電壓：3500V；

e）干燥氣溫度：330℃；

f）干燥氣流速：8 L/min；

g）定性離子對、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量見表2。

表2 那非類物質(zhì)的定性離子對、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量

* ：定量離子

5.3 定性測定

按照上述條件測定試樣和混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，如果試樣中的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中的某種組分一致（變化范圍在±2.5%之內(nèi)）；試樣中定性離子對的相對豐度與濃度相當(dāng)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定為試樣中存在該組分。

表3 定性確證時(shí)相對離子豐度的zui大允許偏差

5.4 定量測定

5.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（3.3.2）分別按儀器參考條件（5.2）進(jìn)行測定，得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積。以混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5.4.2 試樣溶液的測定

將試樣溶液（5.1）按儀器參考條件（5.2）進(jìn)行測定，得到相應(yīng)的樣品溶液的色譜峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中組分的濃度，平行測定次數(shù)不少于兩次；試樣待測液響應(yīng)值若低于標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，應(yīng)取5.1中試樣提取續(xù)濾液進(jìn)行分析；試樣待測液響應(yīng)值若超出標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，應(yīng)用乙腈稀釋后進(jìn)行分析。

標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖參見附錄B的圖B.1-B.11。

1. 結(jié)果計(jì)算

結(jié)果按式（1）計(jì)算：

…………………………………………（1）

式中：

X—試樣中某種組分的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；

c—由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中某種組分的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；

V—試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）；

m—試樣稱取的質(zhì)量，單位為克（g）；

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

1. 精密度

在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的差值不得超過算術(shù)平均值的10%。

1. 其他

當(dāng)稱樣量為2.00 g，定容體積為50mL時(shí)，西地那非、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、伐地那非、偽伐地那非、他達(dá)拉非檢出限為2μg/kg，硫代艾地那非、紅地那非、氨基他達(dá)拉非檢出限為5μg/kg，那紅地那非檢出限為8μg/kg。

附錄 A

那非類標(biāo)準(zhǔn)品信息

表A.1 那非類標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量

附錄 B

那非類標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖 B.1 西地那非色譜圖圖B.2豪莫西地那非色譜圖圖B.3羥基豪莫西地那非色譜圖

圖 B.4 那莫西地那非色譜圖圖 B.5 硫代艾地那非色譜圖圖 B.6 紅地那非色譜圖

圖 B.7 那紅地那非色譜圖圖 B.8 伐地那非色譜圖圖 B.9 偽伐地那非色譜圖

圖 B.10 他達(dá)拉非色譜圖圖 B.11 氨基他達(dá)拉非色譜圖